Отправить другу/подруге по почте ссылку на эту страницуВариант этой страницы для печатиНапишите нам!Карта сайта!Помощь. Как совершить покупку…
московское время28.03.24 21:05:02
На обложку
Динамика баланса массы ледников в связи с макроциркуляционными…авторы — Федоров В. М.
Рабочее движение в гоминьдановском Китае 1927—1937 гг.авторы — Акатова Т. Н.
Физика полупроводниковых соединений элементов III и V группавторы — Маделунг О.
б у к и н и с т и ч е с к и й   с а й т
Новинки«Лучшие»Доставка и ОплатаМой КнигоПроводО сайте
Книжная Труба   поиск по словам из названия
Авторский каталог
Каталог издательств
Каталог серий
Моя Корзина
Только цены
Рыбалка
Наука и Техника
Математика
Физика
Радиоэлектроника. Электротехника
Инженерное дело
Химия
Геология
Экология
Биология
Зоология
Ботаника
Медицина
Промышленность
Металлургия
Горное дело
Сельское хозяйство
Транспорт
Архитектура. Строительство
Военная мысль
История
Персоны
Археология
Археография
Восток
Политика
Геополитика
Экономика
Реклама. Маркетинг
Философия
Религия
Социология
Психология. Педагогика
Законодательство. Право
Филология. Словари
Этнология
ИТ-книги
O'REILLY
Дизайнеру
Дом, семья, быт
Детям!
Здоровье
Искусство. Культурология
Синематограф
Альбомы
Литературоведение
Театр
Музыка
КнигоВедение
Литературные памятники
Современные тексты
Худ. литература
NoN Fiction
Природа
Путешествия
Эзотерика
Пурга
Спорт

/Наука и Техника/Биология

Электронная микроскопия для начинающих — Уикли Б.
Электронная микроскопия для начинающих
Уикли Б.
год издания — 1975, кол-во страниц — 325, язык — русский, тип обложки — твёрд. картон, масса книги — 340 гр., издательство — Мир
КНИГА СНЯТА С ПРОДАЖИ
Сохранность книги — хорошая

Beginner's Handbook
in Biological Electron
Microscopy

Brenda S. Weakley
Lecturer in Anatomy,
The University, Dundee

Churchill Livingstone
Edinburg and London 1972


Пер. с англ. к-та мед. наук И. В. Викторова

Формат 84x108 1/32. Бумага типографская №2
ключевые слова — микроскоп, ультрамикротом, контрастирован, цитохим, радиоавтограф, ультраструктур, подлож, метакрил, рнк, уранилацетат, цитоплазм, люминесцен, заливочн, ультратонк, рентген, микрофотограф, иммуноэлектрон, фиксатор, осмиев, аралдит, эпон, вестопал

Просто и ясно написанное руководство для биологов и медиков, использующих в своих исследованиях электронный микроскоп; особенно большую ценность книга представляет дли начинающих исследователей. Рассмотрены теоретические основы электронной микроскопии; методы фиксации, обезвоживания, заливки; ультрамикротомия; контрастирование; интерпретация полученных картин; электронно-микроскопическая цитохимия и радиоавтография; ряд дополнительных методик.

Предназначена для биологов и медиков различных специальностей, для студентов и преподавателей биологических факультетов университетов, медицинских и сельскохозяйственных институтов.


Читатель, которому адресована книга Б. Уикли, определён самим автором — начинающий микроскопист, пожелавший спуститься (или подняться?) до уровня макромолекул. Лет 10—15 назад таких людей во всём мире можно было пересчитать по пальцам. И только за последние годы электронный микроскоп превратился из уникального, «экзотического» прибора в обычный, доступный большинству биологов инструмент исследования. Спектр использования микроскопов различных типов в биологии чрезвычайно широк — от систематики растений и энтомологии до молекулярной биологии и генетики. Чрезвычайно многочисленны и разнообразны и те методические подходы, которые используются для приготовления препаратов. Если ещё учесть, что от момента фиксации препарата до получения фотографий его ультраструктуры проходит 1—2 недели, то станет понятным, насколько трудоёмки современные методики электронно-микроскопических исследований. Своеобразие работы в этой области состоит также и в том, что, несмотря на более чем 20-летнюю историю развития, в электронной микроскопии до сих пор нет устоявшихся, общепринятых методических приёмов. Каждый опытный исследователь вносит собственные модификации в методы, в каждой лаборатории существуют свои «секреты», которые остаются секретами не потому, что их тщательно оберегают, а потому, что в публикуемые статьи часто невозможно включить все те методические тонкости и уловки, которые используются в повседневной работе. Поэтому для начинающих особенно важно поработать несколько месяцев в хорошо оснащённой лаборатории, где в качестве основного метода исследований используется электронная микроскопия. К сожалению, такой путь по ряду причин не всегда доступен; зачастую начинающим приходится «вариться в собственном соку». В этом случае хорошим советчиком и помощником могут служить такие руководства по технике электронной микроскопии, как книга Б. Уикли.

Эта книга — не простой перечень тех методических приёмов, которые используются в электронной микроскопии. Автор делится такими, казалось бы, незначительными подробностями работы, от которых во многом зависит успех исследований. Руководство охватывает практически все разделы электронной микроскопии, включая такие новейшие методы, как сканирующую и высоковольтную микроскопию. Однако наиболее детально Б. Уикли описывает методические приёмы, связанные с подготовкой биологических объектов для просвечивающей электронной микроскопии. Главы, посвящённые приготовлению сеток, плёнок-подложек, фиксации, заключению образца, могут служить хорошим пособием в повседневной работе не только для начинающего, но и для опытного микроскописта. Однако, так как руководство адресовано именно начинающим, необходимо сделать некоторые замечания относительно ряда методик. Так, Уикли подробно описывает способ фиксации ткани по Паладу и метод заключения ткани в эфиры метакриловой кислоты (метакрилаты). В настоящее время метакрилаты вышли из употребления, так как эти заливочные среды обладают рядом крупных недостатков: высокой экстрагирующей способностью, сильной усадкой при полимеризации и т. д. Также практически не используется фиксация по Паладу (1%-ный OsO4, приготовленный на веронал-ацетатном буфере), так как этот фиксатор экстрагирует из ткани слишком большое количество белков. С некоторой осторожностью необходимо относиться и к таким новейшим приёмам цитохимии, как, например, реакция на выявление РНК. Действительно, последовательное использование для окраски срезов уранилацетата, ЭДТА и свинца позволяет выявить в ядре и цитоплазме клеток РНК-содержащие структуры, однако нет строгих доказательств, что такой способ обработки вызывает повышение контраста только РНК-содержащих структур. Вообще, начинающий исследователь должен отдавать себе отчёт в том, что во многих разделах электронной микроскопии до сих пор преобладает эмпирический подход. Так, не разработано строго научных рекомендаций относительно способа фиксации материала, нет работ по химии контрастирования ультратонких срезов, в «зачаточном состоянии» находятся цитохимические методики электронной микроскопии. Именно поэтому некоторые приёмы, используемые в электронной микроскопии, можно вслед за Уикли назвать «искусством».

Нельзя согласиться также с некоторыми рекомендациями Уикли, касающимися обслуживания электронного микроскопа. Как показывает практика работы многих лабораторий нашей страны, наиболее целесообразно иметь в штате лаборатории квалифицированного инженера, который вёл бы постоянное наблюдение за эксплуатацией электронного микроскопа, осуществлял бы профилактический осмотр прибора, его юстировку и т. д. Это не только продлило бы срок службы такого дорогого прибора, как электронный микроскоп, но и позволило бы наиболее полно использовать его возможности.

В заключение, адресуясь опять-таки к начинающим, можно сказать, что мало овладеть всеми тонкостями электронно-микроскопических методик. Применение такого чрезвычайно трудоёмкого метода, как электронная микроскопия, будет оправдано только в том случае, если поставленную конкретную научную задачу невозможно решить никаким другим методом.

Предисловие к русскому изданию
В. Ю. Поляков

ОГЛАВЛЕНИЕ

Предисловие к русскому изданию8
Предисловие автора9
 
Глава 1. Элементарные основы теории электронной микроскопии11
 
Разрешающая способность (разрешение)11
Волновая природа электронного луча11
Основы конструкции электронного микроскопа12
Электронная пушка14
Магнитные линзы16
Физические явления и дефекты линз, ограничивающие возможности
электронного микроскопа20
Люминесцентный экран27
Вакуумная система28
Система охлаждения29
Единицы длины и давления, применяемые в электронной микроскопии30
Список литературы31
 
Глава 2. Обработка тканей33
 
Предостережение33
Выбор экспериментальных животных и взятие тканей35
Фиксация36
Механизмы фиксации40
Буферные растворы, обычно используемые для приготовления
фиксаторов44
Утрата компонентов ткани при её обработке45
Осмотическое давление48
Обезвоживание и заливка54
Типы заливочных сред56
Влияние заливочной среды на ткань58
Важность строгого соблюдения принятой методики обработки ткани59
Схема обработки ткани, рекомендуемая для текущей работы60
Список литературы62
 
Глава 3. Приготовление ультратонких срезов для электронной
микроскопии68
 
Необходимость ориентировки срезов69
Стеклянные ножи69
Способы изготовления стеклянных ножей70
Приборы для изготовления стеклянных ножей70
Оценка качества стеклянного ножа77
Алмазные ножи80
Резка80
Материалы, необходимые при резке81
Резка срезов толщиной 1 мкм83
Окраска срезов толщиной 1 мкм84
Заточка блока для получения ультратонких срезов85
Ультрамикротомия86
Определение толщины срезов90
Некоторые проблемы, возникающие в процессе резания90
Вылавливание срезов91
Качество срезов93
Резка ткани для исследований с высоким разрешением94
Ультратонкие замороженные срезы95
Список литературы95
 
Глава 4. Контрастирование (окрашивание) биологических материалов
для электронной микроскопии96
 
Возникновение контраста изображения96
Усиление контраста97
Окрашивание при фиксации и обезвоживании98
Окрашивание ультратонких срезов99
Избирательность и специфичность100
Наиболее часто употребляемые методы окрашивания101
Двойное окрашивание103
Просмотр среза перед окрашиванием103
Значение размеров частиц красителя104
Поверхностное окрашивание105
Негативное контрастирование107
Список литературы108
 
Глава 5. Режим управления электронным микроскопом111
 
Типичные операции при повседневной работе на электронном микроскопе112
Как ввести образец в микроскоп113
Как получить хорошее освещение114
Как найти участок образца для исследования116
Что фотографировать117
Как фокусировать119
Как фокусировать, не допуская загрязнения среза121
Как фотографировать121
Как извлечь фотоматериал из микроскопа и перезарядить камеру123
О важности повторной проверки коррекции астигматизма124
Основные неполадки, возникающие при работе на микроскопе125
Аварийное выключение127
Что надо делать, закончив работу на микроскопе128
Загрязнение образца129
Определение степени загрязнённости130
Удаление материала из образца («возгонка»)131
Устройство для защиты от загрязнений131
Коррекция астигматизма132
Опасность рентгеновского облучения135
Электронная микроскопия с высоким разрешением135
Список литературы135
 
Глава 6. Фотолабораторные работы137
 
Фотографический процесс137
Проявители139
Закрепители139
Пластинки140
Катушечная плёнка140
Форматная (плоская) плёнка140
Проявление и получение отпечатков141
Проявление пластинок142
Получение позитивов с фотопластинок144
Рабочие отпечатки146
Увеличение микрофотографий147
Что делать с неравномерно экспонированными негативами148
О чистоте в фотолаборатории149
О различиях в действии электронов и света на фотографические
эмульсии149
Увеличители151
Машины для обработки отпечатков152
Список литературы153
 
Глава 7. Некоторые общие советы, связанные с изучением
ультраструктуры154
 
Изучение ультраструктуры. Предварительное обсуждение156
Анализ опубликованных микрофотографий156
Подготовительная работа со световым микроскопом158
Важность ориентировки материала перед изготовлением срезов159
Полноценный образец ткани161
Изучение ультраструктуры: анализ полученных микрофотографий162
Артефакты165
Измерение структур на электронных микрофотографиях170
Планирование исследовательской работы175
Ведение протоколов176
Необходимость следить за литературой176
Список литературы177
 
Глава 8. Ультраструктурная цитохимия180
 
Информация, получаемая при использовании двух или более фиксаторов180
Ограничения позитивного окрашивания183
Определение местонахождения (локализации) специфических белков
в тканях184
Локализация ферментов184
Электронная микроскопия иммунных реакций (иммуноэлектронная
микроскопия)188
Выявление локализации полисахаридов и муцинов190
Методы ферментативного переваривания193
Параллельные цитохимические исследования на срезах толщиной 1 мкм,
проводимые с помощью светового микроскопа200
Новые направления в развитии ультраструктурной цитохимии201
Криоультрамикротомия201
Аналитическая электронная микроскопия203
Список литературы205
 
Глава 9. Радиоавтография в электронной микроскопии213
 
Теоретические основы метода214
Радиоавтография в световой микроскопии214
Радиоавтография на электронно-микроскопическом уровне215
Схема метода216
Список литературы222
 
Глава 10. Краткий обзор других методов электронной микроскопии223
Методы замораживания223
 
Замораживание — высушивание223
Замораживание — замещение226
Резка замороженных образцов (криоультрамикротомия)227
Замораживание — травление227
Исследование поверхностей в электронной микроскопии232
Тонкие плёночные реплики и оттенение232
Сканирующий электронный микроскоп234
Высоковольтная электронная микроскопия238
Принцип конструкции высоковольтного электронного микроскопа238
Применение высоковольтной электронной микроскопии в биологии239
Наклонный объектный столик241
Фотографические методы усиления деталей объекта242
Список литературы243
 
Глава 11. Повседневный уход за электронным микроскопом247
 
Договоры на обслуживание249
Центрировка250
Опасность рентгеновского облучения253
Испытание работы микроскопа после окончания его центрировки254
Калибровка увеличения256
Некоторые общие сведения о повседневном уходе за микроскопом256
Когда микроскоп следует оставить в покое256
Расписание и протоколы обслуживания258
Смена нити накала259
Центрировка диафрагм конденсорной и объективной линз262
Методы чистки электронного микроскопа262
Уход за насосами265
Влагопоглотители265
Водные фильтры266
Воздушные фильтры266
Обновление люминесцентного экрана266
Блок высокого напряжения267
Справочники267
Некоторые наиболее часто встречающиеся неисправности и
их устранение267
Список литературы272
 
Приложение273
 
I. Как пользоваться веществами, гидратированными в различной степени273
II. Молярности кислот и щелочей, обычно применяемых для получения
заданных величин рН фиксаторов и буферных растворов274
III. Фиксаторы275
Осмиевые факторы275
Альдегидные фиксаторы278
Перманганатные фиксаторы281
IV. Буферы для промывки и хранения ткани282
V. Заливочные среды283
Заливка в аралдит284
Заливка в эпон286
Смеси эпон-аралдит287
Заливка в вестопал W288
Заливка в метакрилаты289
Водорастворимая заливочная среда290
VI. Окрашивание ультратонких срезов для усиления их контраста292
Окрашивание, приводящее к общему неспецифическому усилению
контраста292
VII. Окрашивание толстых (1—2 мкм) срезов после заливки материала
в эпоксидные смолы или акриловые пластмассы298
VIII. Приготовление плёнок-подложек301
IX. Мытьё посуды и отмывка сеток307
Мытьё стеклянной посуды307
Отмывка опорных сеток309
X. Фотографирование310
Ослабитель по Фармеру и способ его применения311
Список Литературы311
 
Предметный указатель314

Книги на ту же тему

  1. Физическая биохимия: Применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии, Фрайфелдер Д., 1980
  2. Биохимия цитоплазмы, Хесин Р. Б., 1960
  3. Биологические ультраструктуры, Финеан Д., 1970
  4. Беседы о рентгеновских лучах, Власов П. В., 1977
  5. Оптика микроскопов. Расчёт и проектирование, Панов В. А., Андреев Л. Н., 1976
  6. Архитектоника чешуи костистых рыб и её диагностическое значение: теоретические основы современных методов экспертного исследования, Чернова О. Ф., Дгебуадзе Ю. Ю., 2008
  7. Введение в электронную микроскопию минералов, Сергеева Н. Е., 1977

Напишите нам!© 1913—2013
КнигоПровод.Ru
Рейтинг@Mail.ru работаем на движке KINETIX :)
elapsed time 0.022 secработаем на движке KINETIX :)