КнигоПровод.Ru28.03.2024

/Наука и Техника/Биология

Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие) — Остерман Л. А.
Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие)
Остерман Л. А.
год издания — 1981, кол-во страниц — 288, тираж — 8000, язык — русский, тип обложки — твёрд. 7Б, масса книги — 360 гр., издательство — Наука
КНИГА СНЯТА С ПРОДАЖИ
Сохранность книги — хорошая

Утверждено к печати Институтом молекулярной биологии АН СССР

Формат 60x90 1/16. Бумага книжно-журнальная. Печать высокая
ключевые слова — белк, нуклеин, электрофорез, центрифуг, полиакриламид, пааг, агароз, ддс-na, элюц, элюат, радиограф, флюорограф, днк, рнк, полимераз, электрофоретич, седиментац, изокинетическ, рибонуклеопротеид

В книге детально описана современная аппаратура, изложены практические приёмы постановки экспериментов, проанализировано влияние на их результаты различных физико-химических параметров. Рассмотрены все варианты и модификации описываемых методов. Даны ссылки на оригинальные экспериментальные работы, опубликованные в ведущих журналах мира по декабрь 1980 г.

Книга рассчитана на биохимиков, медиков, фармакологов, работников пищевой промышленности.

Табл. 4, илл. 77, библиогр. 294 назв.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Часть первая
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
 
Введение3
 
Глава 1
Гели для электрофореза7
Полиакриламидный гель (ПААГ)7
Исходные материалы7
Процесс полимеризации ПААГ10
Выбор концентраций мономеров13
Агароза16
Смешанный гель (агароза+ПААГ)20
Ацетатцеллюлозная плёнка, импрегнированная ПААГ21
 
Глава 2
Техника приготовления гелей и аппаратура21
Вертикально расположенные трубки21
Вертикально расположенные пластины26
Горизонтально расположенные пластины32
 
Глава 3
Электрофорез белков37
Замечания общего характера37
Миграция белков в геле37
Напряжённость электрического поля (H)38
Выбор буфера рабочего геля40
Выделение тепла при электрофорезе42
Загрузка геля. Ширина белковых зон44
Введение мочевины и β-меркаптоэтанола. Некоторые артефакты46
Лидирующие красители47
Разделение белков по размерам и заряду48
Выбор рабочего буфера48
Использование мочевины50
Загрузка геля и подготовка препарата52
Некоторые примеры53
Разделение белков по размеру с использованием ДДС-Na56
Существо метода56
Выбор пористости геля59
Присутствие мочевины и неполных детергентов60
Выбор рабочего буфера геля61
Подготовка белкового препарата62
Проведение электрофореза63
Окрашивание и элюция белков64
Ступенчатый электрофорез (disc-electrophoresis)66
Градиент пористости ПААГ73
Двумерный электрофорез в ПААГ76
Электрофорез с использованием Тритона Х-100 и цетавлона83
Тритон Х-10083
Цетавлон85
Окрашивание белков в ПААГ88
Кислые красители90
Другие красители и методы окрашивания94
Флюоресцентные красители97
Локализация ферментов после электрофореза101
Локализация белковых полос осаждением ДДС-Na104
Элюция белков из геля105
Определение радиоактивности белков после электрофореза в ПААГ109
Счёт радиоактивности в элюатах белка109
Растворение ПААГ110
Импрегнирование сцинтиллятора в гель111
Авторадиография112
Флюорография113
Препаративный электрофорез белков116
 
Глава 4
Электрофорез нуклеиновых кислот120
Замечания общего характера120
Выбор буфера геля и напряжённости электрического поля120
Выбор характера геля и его пористости121
Влияние вторичной структуры123
Маркерные молекулы125
Лидирующие красители126
Электрофорез в мягких условиях126
Фракционирование плазмид и фрагментов ДНК126
Фракционирование РНК128
Электрофорез в денатурирующих гелях128
Щелочные гели129
Гели, содержащие мочевину. Секвенирование ДНК и РНК131
Денатурирующие гели с формамидом135
Денатурирующие гели с формальдегидом138
Гели, содержащие гидроокись метилртути140
Денатурация нуклеиновых кислот глиоксалем142
Использование градиентов пористости ПААГ142
Двумерный электрофорез нуклеиновых кислот и их фрагментов144
Некоторые особые случаи электрофореза нуклеиновых кислот147
Электрофорез в геле агарозы тройного комплекса
ДНК—РНК-полимераза—РНК147
Выявление мРНК при электрофорезе суммарной РНК в геле агарозы148
Использование жидкого (не сшитого) ПААГ149
Окрашивание нуклеиновых кислот после электрофореза150
Элюция нуклеиновых кислот из гелей153
Элюция из ПААГ за счёт диффузии153
Элюция из гелей агарозы154
Электрофоретическая элюция158
Перенос нуклеиновых кислот из геля на нитроцеллюлозные фильтры
и диазобумагу162
Определение радиоактивности165
Препаративный электрофорез нуклеиновых кислот166
Литература168
 
Часть вторая
УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
 
Введение174
 
Глава 1
Основные понятия теории седиментации175
 
Глава 2
Ультрацентрифуга177
Принцип действия и расположение важнейших узлов177
Проверка готовности основных систем к пуску179
Пуск центрифуги180
 
Глава 3
Роторы и пробирки182
Угловые роторы182
Пробирки для угловых роторов184
Уход за роторами и пробирками187
Роторы со свободно подвешенными пробирками (бакет-роторы)189
Роторы с вертикальными пробирками191
Максимально допустимая частота вращения ротора191
Зональные роторы193
Особенности эксплуатации и ухода197
 
Глава 4
Раздельное осажденме частиц (дифференциальное центрифугирование)199
 
Глава 5
Зонально-скоростное центрифугирование201
Константа седиментации203
Изокинетический градиент плотности204
Выбор среды206
Характеристики растворов сахарозы210
Профиль градиента сахарозы213
Создание градиента плотности сахарозы214
Наслоение препарата на градиент219
Фракционирование («раскапывание») градиента220
Выбор режима центрифугирования223
Некоторые примеры центрифугирования в градиентах сахарозы232
Фракционирование рибонуклеопротеидов232
Фракционирование РНК235
Фракционирование ДНК237
 
Глава 6
Равновесное (изопикническое) центрифугирование240
Способы образования и общая характеристика градиентов плотности241
Выбор соли для создания градиента плотности247
Градиенты плотности растворов CsCl250
Преформирование градиента251
Равновесное центрифугирование в угловых роторах253
Центрифугирование в роторах с вертикальными пробирками257
Фракционирование и детектирование равновесных градиентов258
Примеры центрифугирования в градиентах плотности растворов CsCl259
Градиенты плотности растворов Cs2SO4263
Градиенты плотности трихлорацетатов цезия и рубидия267
Градиенты плотности растворов KI и NaI268
Градиенты плотности растворов метризамида270
 
Глава 7
Центрифугирование в зональных роторах275
 
Литература277
Предметный указатель279

Книги на ту же тему

  1. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами, Остерман Л. А., 1983
  2. Физическая биохимия: Применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии, Фрайфелдер Д., 1980
  3. Введение в количественную цитохимию, Вид Д., 1969
  4. Путешествие в мир живой клетки, де Дюв К., 1987
  5. Физико-химические свойства нуклеиновых кислот: Электрические, оптические и магнитные свойства нуклеиновых кислот и их компонентов, Дюшен Ж., ред., 1976
  6. Разделение клеточных частиц и макромолекул, Альбертсон П., 1974
  7. Биофизика: Учебник. — 3-е изд., испр. и доп.: В 2 т. (комплект из 2 книг), Рубин А. Б., 2004
  8. Молекулярная и клеточная биофизика, Франк Г. М., ред., 1977
  9. Введение в молекулярную биологию, Хаггис Д., Михи Д., Мюир А., Робертс К., Уокер П., 1967
  10. Молекулы и клетки. Выпуск 7, Георгиев Г. П., ред., 1982
  11. Молекулярная биология: Избранные разделы. — 2-е изд., испр. и доп., Ашмарин И. П., 1977
  12. Итоги науки и техники: Молекулярная биология. Том 22, Киселев Л. Л., Михайлов В. С., ред., 1986
  13. Биологическая химия: Учебник, Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф., 1983
  14. Химия белка. Часть 2, Ашмарин И. П., Садикова Н. В., Тукачинский С. Е., Мюльберг А. А., 1971
  15. Химия белка: Сборник статей, Ботвинник М. М., ред., 1969
  16. «Белок-машина». Биологические макромолекулярные конструкции. — 2-е изд., доп., Чернавский Д. С., Чернавская Н. М., 1999
  17. Организация аппарата трансляции хлоропластов и его роль в биогенезе мембран, Филиппович И. И., 2006
  18. Макромолекулярная химия желатина, Вейс А., 1971
  19. Растворы высокомолекулярных соединений. — 2-е изд., Воюцкий С. С., 1960
  20. Методы иммунохимического анализа в биологии развития (практическое руководство), Михайлов А. Т., Симирский В. Н., 1991
  21. Иммунологические методы, Фримель Г., ред., 1987

© 1913—2013 КнигоПровод.Ruhttp://knigoprovod.ru